ADN recombinante artificial y Ácidos Nucléicos recombinantes en la naturaleza.

Tema:

Obtención del SARS-CoV-2 a partir de un único cromosoma artificial bacteriano (BAC). 

Objetivo:

Crear y analizar un clon infeccioso del SARS-CoV-2 empleando una estrategia basada en cromosomas artificiales bacterianos (BAC), con fines de estudio en antivirales y desarrollo de vacunas.

Gen o secuencia a clonar:

Genoma completo del SARS-CoV-2 con una longitud de 29,903 pares de bases, correspondiente a la cepa USA-WA1/2020. 

Enzima de restricción:

MluI y BstBI. 

Enzima ligasa:

No se especifica una enzima concreta, aunque se emplea una ligasa de ADN convencional durante el ensamblaje del BAC. 

Vector:

Plásmido pBeloBAC11 

Célula receptora:

Células Vero E6 

Mecanismo de transferencia o inserción del gen:

• Transfección del BAC portador del genoma completo del SARS-CoV-2 en células Vero E6. 

Métodos de identificación de clones:

• Cultivo de células Vero E6 en medio DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium)
• Secuenciación
• Inmunofluorescencia utilizando un anticuerpo monoclonal
• Digestión con enzimas de restricción para confirmar las mutaciones introducidas (1).

Imagen tomada de: https://journals.asm.org/doi/full/10.1128/mbio.02168-20

Ácidos nucleicos recombinantes en la naturaleza

Proceso de Transformación Bacteriana

El texto aborda los mecanismos implicados en la transformación bacteriana y la transferencia horizontal de plásmidos en Escherichia coli (E. coli), proceso crucial en la adaptación bacteriana y la diseminación de genes de resistencia a antibióticos. La transformación bacteriana consiste en la incorporación de ADN ambiental libre, lo que permite a las bacterias adquirir nuevas propiedades genéticas. El análisis se enfoca en cómo determinados alimentos pueden inducir competencia en E. coli, facilitando este proceso, y en la relevancia de los plásmidos no conjugativos. Los hallazgos indican que ciertos factores ambientales pueden afectar la capacidad de E. coli para volverse competente y asimilar ADN externo, subrayando el papel de estos mecanismos en la evolución bacteriana y la aparición de resistencia antimicrobiana (2).

Referencias:

1. Ye C, Chiem K, Park J-G, Oladunni F, Platt RN II, Anderson T, et al. Rescue of SARS-CoV-2 from a single bacterial artificial chromosome. MBio [Internet]. 2020;11(5). Disponible en: http://dx.doi.org/10.1128/mbio.02168-20
2. Hasegawa H, Suzuki E, Maeda S. Horizontal Plasmid transfer by transformation in Escherichia coli: Environmental factors and possible mechanisms. Front Microbiol [Internet]. 2018;9. Disponible en: http://dx.doi.org/10.3389/fmicb.2018.02365