Técnica de Western blot en enfermedad de Lyme

En este estudio se empleó la técnica de Western blot para identificar las proteínas inmunogénicas de Borrelia burgdorferi, el microorganismo responsable de la enfermedad de Lyme. Se recolectaron muestras de sangre tanto de pacientes con diagnóstico confirmado como de conejos y ratones infectados experimentalmente con la bacteria. Al analizar las respuestas inmunológicas mediante los sueros de conejos infectados, se observaron reacciones significativas contra proteínas con pesos moleculares de 31, 32.5, 34, 35, 38, 39–40, 41, 66, 83 y 93 kDa. De todas ellas, la proteína de 41 kDa —identificada como flagelina— presentó reactividad parcial, y se considera un marcador importante para el diagnóstico serológico, de acuerdo con los criterios establecidos por los CDC.

Tema:

Identificación de proteínas inmunogénicas de Borrelia burgdorferi para el desarrollo de una vacuna contra la enfermedad de Lyme.

Objetivos:

Determinar los antígenos reactivos comunes en la infección por Borrelia burgdorferi reconocidos en sueros de mamíferos que puedan ser útiles para el desarrollo de una vacuna contra la enfermedad de Lyme.

Tipo de muestra biológica:

Sueros obtenidos de pacientes humanos con enfermedad de Lyme documentada, y de conejos y ratones infectados experimentalmente con Borrelia burgdorferi.

Corte con Enzima de restricción:

No se menciona el uso de enzimas de restricción en el procedimiento descrito.

Corrido electroforético:

Se realizó electroforesis en gel de poliacrilamida para separar los lisados de células completas de Borrelia burgdorferi y las escaleras de proteínas.

Blotting:

Las proteínas separadas por electroforesis fueron transferidas a membranas de nitrocelulosa utilizando la técnica de Western blot.

Unión con sondas:

Se utilizaron reactivos de IgG anti-HRP (fosfatasa alcalina conjugada con anti-IgG de conejo, anti-IgG humano y anti-IgG de ratón) como sondas para detectar las proteínas inmunorreactivas en las membranas.

Visualización:

Las membranas fueron visualizadas utilizando sustratos de bromo-cloro-indolilo o ECL Ultra A/B para detectar las conjugaciones de fosfatasa alcalina unidas a los anticuerpos, revelando las bandas inmunorreactivas.

Referencia bibliográfica:

1. Loomba K, Shi D, Sherpa T, Chen J, Daniels TJ, Pavia CS, et al. Use of the Western blot technique to identify the immunogenic proteins of Borrelia burgdorferi for developing a Lyme disease vaccine. Biomed Pharmacother [Internet]. 2023 [citado el 23 de junio de 2024];157(114013):114013. Disponible en: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/36403566/